by

Prinsip Kerja dan Kegunaan dari Mikroskop Fluoresensi

Mikroskop Fluoresensi

Fluoresensi adalah efek fisik yang disebabkan ketika suatu zat memancarkan energi cahaya saat disinari dengan cahaya atau bentuk lain dari radiasi elektromagnetik. Mikroskop fluoresensi adalah mikroskop optik yang menggunakan fluoresensi dan pendar di tempat atau dalam kombinasi dengan refleksi dan penyerapan untuk mempelajari sifat optik objek organik dan anorganik.

Prinsip Kerja dan Kegunaan dari Mikroskop Fluoresensi

Mikroskop fluoresensi membantu dalam memvisualisasikan struktur sub-seluler dan internal suatu objek dengan kejelasan yang lebih baik. Ditemukan pada awal abad kedua puluh oleh August Köhler, Carl Reichert, dan Heinrich Lehmann.

Prinsip Kerja Mikroskop Fluoresensi

Mikroskop fluoresensi biasanya bekerja berdasarkan prinsip pewarnaan komponen dan struktur sampel dengan pewarna. Ini karena sebagian besar komponen seluler tidak berwarna di alam. Oleh karena itu, mereka tidak dapat dengan mudah dibedakan satu sama lain.

Fluorofor atau molekul fluoresen yang disinari dengan cahaya gelombang pendek atau sinar elektromagnetik cenderung memancarkan cahaya. Cahaya yang dipancarkan memiliki panjang gelombang yang lebih panjang dibandingkan dengan cahaya datang.

Biasanya, durasi waktu antara iradiasi dan emisi adalah orde nanodetik dan dapat diabaikan dengan mudah. Cahaya yang dipancarkan dipisahkan dari cahaya datang, yang memberi tahu lokasi pasti dari fluorofor. Gambar sampel dihasilkan berdasarkan cahaya sekunder dan bukan berdasarkan cahaya datang primer.

Kerja Mikroskop Fluoresensi

Mikroskop fluoresensi bekerja dengan cara yang sama seperti mikroskop optik. Ini terdiri dari sumber cahaya yang kuat, filter bandpass khusus, dan pelabelan fluoresen sampel. Sampel yang akan dipelajari diletakkan di bawah mikroskop.

Sinar cahaya yang memiliki panjang gelombang cukup pendek untuk merangsang fluorofor dibuat jatuh pada sampel. Sinar cahaya ini difokuskan pada spesimen dengan bantuan lensa objektif. Sinar tereksitasi yang dipancarkan oleh spesimen kemudian difokuskan pada detektor melalui lensa objektif.

Sebagian besar sinar cahaya yang menggairahkan ditransmisikan melalui objek sampel, sementara sebagian lagi dipantulkan kembali dan mencapai detektor.

Komponen Mikroskop Fluoresensi

1. Fluorofor

Fluorofor adalah senyawa kimia yang memiliki kemampuan untuk memancarkan cahaya karena tereksitasi oleh gelombang elektromagnetik atau cahaya. Ini juga dikenal sebagai pewarna fluorescent. Fluorofor pada dasarnya terdiri dari kombinasi gugus aromatik atau molekul bidang/siklik dengan berbagai ikatan .

2. Sumber Cahaya

Sumber cahaya adalah salah satu komponen yang paling penting dari mikroskop fluoresensi. Di sini, sumber cahaya yang paling umum digunakan untuk eksitasi termasuk laser, LED daya tinggi, lampu busur xenon, lampu uap merkuri, dll.

3. Filter Eksitasi

Filter eksitasi yang digunakan dalam mikroskop fluoresensi biasanya merupakan filter bandpass yang memungkinkan sinyal jatuh ke bandwidth tertentu sambil menolak semua yang lain. Panjang gelombang yang diserap oleh fluorofor mudah dilewati, sedangkan radiasi cahaya yang dipantulkan terhalang.

4. Cermin Dichroic

Sebuah cermin dichroic bertindak sebagai filter film tipis. Penggunaan utama cermin dichroic adalah untuk secara selektif melewatkan cahaya dari rentang warna yang kecil sambil memantulkan yang lainnya. Ini juga dikenal sebagai filter warna yang akurat.

5. Filter Emisi

Filter emisi adalah jenis filter bandpass. Cara kerja filter emisi mirip dengan filter eksitasi. Ini melewati radiasi cahaya yang dipancarkan oleh fluorofor sambil menghalangi cahaya eksitasi.

Keuntungan Mikroskop Fluoresensi

1. Sensitivitas mikroskop fluoresensi sangat tinggi, yaitu, kira-kira sama dengan 50 molekul per mikrometer kubik.

2. Dengan bantuan mikroskop fluoresensi, molekul yang berbeda dapat diwarnai dengan warna yang berbeda sehingga memungkinkan pengguna untuk menggambarkan beberapa molekul suatu zat pada saat yang bersamaan.

3. Mikroskop fluoresen relatif lebih efisien daripada mikroskop optik tradisional.
4. Dapat digunakan untuk pencitraan in vivo dan in vitro.
5. Mikroskop fluoresensi memiliki kemampuan untuk mengisolasi protein individu dengan tingkat presisi yang tinggi.
6. Mikroskop fluoresensi paling cocok untuk pencitraan dan mempelajari perilaku dinamis yang ditunjukkan oleh sel-sel hidup.
7. Mikroskop fluoresen mampu menghasilkan gambar dengan resolusi dan kejelasan yang tinggi. Dengan demikian, meningkatkan penelitian.
8. Alat ini adalah kombinasi dari sifat pembesar mikroskop optik dan visualisasi fluoresensi.
9. Mikroskop fluoresen dapat digunakan untuk menghasilkan gambar tiga dimensi yang diperbesar dari sampel yang sedang dipelajari

Comment

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

3 comments